对于养细胞的专业户，血清大家再熟悉不过了，其在细胞培养中的重要地位也是不言而喻的。血清类产品中，应用较多的应属牛血清，其中胎牛血清 (Fetal Bovine Serum, FBS) 更是被广泛应用于细胞培养、蛋白质表达等生物科技领域。作为养细胞的科研达人，我们一直坚守养细胞的“三原则”：细胞来源 —— 严格把关，实验操作 —— 正确规范，培养体系 —— 优选合适。
血清作为细胞培养体系的关键成分之一，可提供激素、各种生长因子、结合蛋白、低分子量的营养素、氨基酸、碳水化合物、维生素等营养物质 (图 1)。在培养基中，通常会添加胎牛或小牛来源的血清来支持细胞生长[1]。合适的培养体系及血清的选择对细胞的生长至关重要[2][3] (图 2–图 3)。
不同牛龄血清所含的促细胞生长因子、促贴附因子、激素及其他活性物质等组分与比例不同。通常来说，牛龄越小的牛血清，细胞培养效果越好。
此外，不同的血清比例对细胞生长状态的影响不同。如在无血清条件下培养 24 小时的 A549 细胞发生了形态学变化[3]。
血清的颜色主要由血红蛋白和胆红素决定的，血红蛋白是红细胞破碎后的直接产物，呈鲜红色；胆红素为红细胞破碎后的代谢产物，颜色偏黄。
此外，采血过程中，影响因素较多，主要受温度与采血到离心的时间的影响，如血红蛋白本身接触空气会发生氧化，颜色则由鲜红色变为暗红色。血清解冻，切忌一步到位，根据小 M 的多年细胞培养经验，建议“步步为营”——逐步解冻法：将血清从 -20℃ 放入 2-8℃ 条件先“冷静”一天，待全部溶解后再使用，后续建议分装冻存。解冻时可轻摇颠倒混匀，减少沉淀产生。
Tips：
1. 高温解冻、剧烈混匀、反复冻融或室温长时间放置等可能会对产品质量产生不同程度的影响。
2. 血清若从 -20℃ 直接转入 37℃ 解冻，极易造成蛋白质凝结并出现沉淀。3. 短期内频繁使用，可将产品置于 2-8℃，建议不超过一个月。
▐ 血清“内涵”之——沉淀“离不离”血清中出现少量絮状沉淀物，一般不会影响血清本身的质量，可正常使用。絮状沉淀物主要来源于已解冻血清中的血纤蛋白及 4℃ 长期保存后血清中的脂蛋白的变性产物。必要时离心去除 (400 g，5 min)，避免过滤去除，絮状物极易堵塞滤膜。
：血清中的沉淀主要有：纤维蛋白、胎球蛋白、脂蛋白、冷凝集素、玻连蛋白、磷酸钙和胆固醇等[4]。血纤蛋白是纤维蛋白原在生理条件下凝固而成的一种材料。血纤蛋白在血清中含量极高且高度不溶，血清冻融时极易析出，由于其具有粘附性，离心时会损失血清中的营养成分。▐ 血清“纠结”之——热灭活“灭不灭”血清热灭活非必要，一般不推荐对血清进行热处理 (热灭活一般指 56℃ 30 min 加热已解冻的血清，目的为灭活血清中的补体。补体参与调理吞噬、细胞裂解、炎症介导、免疫调节及免疫复合物清除等反应)。▐ 血清“精致”之——3 次 0.1 µm 过滤MCE FBS 经无菌采集、批量混合、三级过滤除菌 (0.1 µm) 分装而成，血红蛋白和内毒素含量水平极低，无细菌、支原体、噬菌体、病毒等污染，且无外源添加因子，不含抗生素、激素等，能够满足各种正常细胞系、肿瘤细胞系、原代细胞、部分干细胞 (胚胎干细胞、间充质干细胞等) 及对培养环境极敏感的细胞。因此，该血清不需要再次进行过滤。
MCE 提供胎牛血清 (Fetal Bovine Serum)，其来源于非疫区健康牛 (不含 BVDV、PI3、IBR、BTV 等牛源病毒)，由剖腹产 5-8 月龄胎牛的血液制备而成，产地乌拉圭。
图 4. SP2/0 细胞生长曲线。
SP2/0 细胞在使用 MCE FBS (Cat. No.: HY-T1000) 培养后，在既定时间内均能达到标准密度，且细胞增殖能力明显优于 Competitor G、Competitor C。
图 5. 产品性能测试 (细胞兼容性及批间稳定性)。
注：单细胞增值率为细胞培养 10 天后孔内有克隆直径> 1.7 mm 的孔所占的百分比。
通过使用不同批次的 FBS (批次 A-Lot. 274594；批次 B-Lot. 274595) 对不同细胞进行培养，进一步证实血清 (HY-T1000) 不仅能兼容各种细胞培养，且批间稳定性好! 大家可以点击领取试用装喔~表 3. 胎牛血清部分质检数据 (Lot：274595)。本期小 M 为大家介绍了细胞培养常用的血清基础知识，以及血清的一些常见问题。希望大家在做实验时能够顺顺利利，早日发 Paper！
| 该胎牛血清 (Fetal Bovine Serum) 来源于非疫区健康牛 (不含 BVDV、PI3、IBR、BTV 等牛源病毒)，由剖腹产 5-8 月龄胎牛的血液制备而成，产地乌拉圭。 |
| 本产品已过滤除菌，可直接使用的常用细胞培养添加剂，其主要促进细胞生长和存活，减少体外细胞的生物合成负担。 |
| 本产品主要成分为延胡索酸泰妙菌素 (Tiamulin fumarate) 和盐酸米诺环素 (Minocycline hydrochloride)，可在不影响细胞状态的前提下，有效抑制和清除在细胞培养中广泛存在的支原体污染，对于常见的革兰氏阴性和阳性菌也有一定的清除作用。 |
| 该抗生素已过滤除菌，可直接用于细胞培养的双抗溶液。 |
| 该抗生素是一种氨基糖苷类抗生素，主要通过干扰 70S 核糖体易位和诱导对 mRNA 模板的错读而抑制细胞蛋白质的正常合成，从而导致细菌、真菌和哺乳动物细胞死亡。 |
| 该产品是一种非程序性即用型细胞冻存液，既适用于常规哺乳动物细胞的冻存，也适用于无血清培养细胞的冻存。 |
| CCK-8 试剂盒是一种基于 WST-8 而广泛应用于细胞活性和细胞毒性检测的快速、高灵敏度试剂盒。 |
| 一种以 JC-1 为荧光探针，快速灵敏地检测组织、细胞或纯化的线粒体跨膜电势差的试剂盒，可以用于早期的细胞凋亡检测。 |
| MCE 细胞线粒体分离试剂盒可快速分离所培养细胞的线粒体，且线粒体纯度较高，绝大多数具有完整的内外膜及生理功能。 |
[1] Liu S, et al. Fetal bovine serum, an important factor affecting the reproducibility of cell experiments. Sci Rep. 2023 Feb 2;13(1):1942.
[2] Jessica Cox, et al. Co-occurrence of Cell Lines, Basal Media and Supplementation in the Biomedical Research Literature. Journal of Data and Information Science. 2020, Vol. 5. Issue (3) : 161-177.
[3] Shin H, et al . Quantifying the level of nanoparticle uptake in mammalian cells using flow cytometry. Nanoscale. 2020 Aug 7;12(29):15743-15751.
[4] Didier Raoult, Patricia Renesto et al. PLoS Pathogens. 2008 Feb., 4(2): e41.